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elisa试剂盒
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Elisa试剂盒技术参数:鸡α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDH)elisa试剂盒
发布日期:[2018/5/3 17:05:35] 共阅[505]次
Elisa试剂盒技术参数:α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDHelisa试剂盒

本试剂盒仅供研究使用。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDH)水平。用纯化的鸡α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDH)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDH),再与HRP标记的α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDH)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMBHRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDH)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中鸡α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDH)浓度。

α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDHelisa试剂盒组成

130倍浓缩洗涤液20ml×17终止液6ml×1

2酶标试剂6ml×18标准品(320pg/ml0.5ml×1

3酶标包被板12孔×89标准品稀释液1.5ml×1

4样品稀释液6ml×110说明书1

5显色剂A6ml×111封板膜2

6显色剂B6ml×1/12密封袋1

标本要求

1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDHelisa试剂盒操作步骤

1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

160pg/ml5号标准品150µl的原倍标准品加入150µl标准品稀释液

80pg/ml4号标准品150µl5号标准品加入150µl标准品稀释液

40pg/ml3号标准品150µl4号标准品加入150µl标准品稀释液

20pg/ml2号标准品150µl3号标准品加入150µl标准品稀释液

10pg/ml1号标准品150µl2号标准品加入150µl标准品稀释液

2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50µl,待测样品孔中先加样品稀释液40µl,然后再加待测样品10µl(样品*终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶标试剂50µl,空白孔除外。

7.温育:操作同3

8.洗涤:操作同5

9.显色:每孔先加入显色剂A50µl,再加入显色剂B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.

10.终止:每孔加终止液50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

计算

以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDHelisa试剂盒注意事项

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间*控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4.请每次测定的同时做标准曲线,*做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔*孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请*后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物请避光保存。

7.严格按照α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDHelisa试剂盒说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1.试剂盒保存:2-8℃。

2.有效期:6个月

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