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elisa试剂盒
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兔前列腺素F2a (PGF2a )ELISA试剂盒使用说明书
发布日期:[2018/1/26 16:04:39] 共阅[521]次
  兔前列腺素F2a PGF2a ELISA试剂盒使用说明书

使用目的:

本试剂盒用于测定兔血清,血浆及相关液体样本中前列腺素 F2aPGF2a)含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中兔前列腺素F2aPGF2a)水平。用纯化的兔前

列腺素 F2aPGF2a)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入前列

腺素 F2aPGF2a)再与 HRP 标记的前列腺素 F2aPGF2a)抗体结合,形成抗体-抗原-

标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP酶的催化下转化成蓝色,

并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的前列腺素 F2aPGF2a)呈正相

关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中兔前列腺素F2aPGF2a)浓度。

标本要求

1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能

马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

2.不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

兔前列腺素F2a PGF2a ELISA试剂盒操作步骤

1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10 孔,在*、第二孔中分别加标

准品 100μl,然后在*、第二孔中加标准品稀释液 50μl,混匀;然后从*孔、第二

孔中各取 100μ分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50μl

混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取 50μ弃掉,再各取 50μ分别加到第五、第六孔

中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各

 50μ分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50μl,混

匀后从第七、第八孔中分别取 50μ加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准

品稀释液 50μl,混匀后从第九第十孔中各取 50μ弃掉。(稀释后各孔加样量都为 50μl

浓度分别为 180ng/L120ng/L 60ng/L30ng/L, 15ng/L)。

2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样

品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40μl,然后再加待测样品 10μl(样

品*终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混

匀。

3. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4. 配液:将 20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 20 倍稀释后备用

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30秒后弃去,如此

重复 5 次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。

7. 温育:操作同 3

8. 洗涤:操作同 5

9. 显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色

15 分钟.

10.终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止

液后 15 分钟以内进行。

计算

以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的

OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD 值计算出标

准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,

即为样品的实际浓度。

兔前列腺素F2a PGF2a ELISA试剂盒注意事项

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未

用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间*

控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4. 请每次测定的同时做标准曲线,*做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD 

大于标准品孔*孔的 OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(倍)后再测定,计

算时请*后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物请避光保存。

7.严格按照兔前列腺素F2a PGF2a ELISA试剂盒说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

检测范围:

10ng/L -200ng/L

规格:

96 人份/

保存条件及有效期

1.试剂盒保存:;2-8℃。

2.有效期:个月

 

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